Analiza ADN-ului de cometă a spermatozoizilor. O metodă pentru procesarea și analizarea imaginilor de obiecte asemănătoare cometei obținute prin metoda ADN-cometă. Incubarea celulelor cu probe de testare

Metoda electroforezei pe gel cu o singură celulă sau metoda ADN cometei este foarte sensibilă și oferă o fiabilitate ridicată a rezultatelor obținute, în același timp este relativ simplă și rapidă de realizat și este, de asemenea, standardizată internațional (OECD Nr. 489). Această metodă este cea mai promițătoare pentru rezolvarea următoarelor probleme:

Biomonitorizarea oamenilor și a mediului, adică identificarea consecințelor mutagenezei induse atunci când o persoană intră în contact cu xenobiotice (medicamente, aditivi alimentari, pesticide, parfumuri și produse cosmetice, produse chimice de uz casnic, precum și cele mai comune apă, aer și cele industriale). pericole, nanomateriale);

Cercetări în domeniul oncologiei;

Studii ale sistemelor de reparare a ADN-ului;

Metoda se bazează pe înregistrarea mobilității diferite într-un câmp electric constant al ADN-ului deteriorat și/sau fragmentelor de ADN ale celulelor individuale lizate, închise într-un gel subțire de agaroză pe o lamă de sticlă standard. În același timp, ADN-ul celulei migrează, formând o urmă electroforetică care seamănă vizual cu o „coadă de cometă”, ai cărei parametri depind de gradul de deteriorare a ADN-ului. După terminarea electroforezei, lamele sunt colorate și analizate folosind microscopie cu fluorescență.

Achiziția imaginilor și prelucrarea datelor se realizează folosind un complex hardware-software, care include o cameră foarte sensibilă combinată cu un microscop și software specializat.

Software-ul universal inteligent inclus în acest complex oferă:

Analiza automată a imaginilor cometelor ADN „un clic”, include toți parametrii de măsurare de bază, inclusiv % ADN în coada cometei;

- reproductibilitate ridicată;

Analiza parametrilor cometelor ADN se realizează atât în ​​modul „în timp real”, cât și din imagini digitale stocate;

Programul prelucrează datele și le afișează sub forma unui protocol în conformitate cu cerințele internaționale ale GLP;

Analiza și compararea datelor;

Programul este pe deplin validat și respectă cerințele internaționale GLP. Are acces ierarhic și sistem de protecție a datelor.

Setul include:

1. Microscop biomedical luminescent Nikon Eclipse Ni-E.

2. Sistem de iluminare epi-fluorescent de 50W, kituri filtru-dicroic-oglinda-filtru pentru coloranti DAPI, FITC, TRITC.

3. Cameră CCD monocromă IEEE1394 FireWire pentru luminiscență. Basler Scout scA1300-32fm. Dimensiunea pixelilor - 3,75 µm x 3,75 µm. Rezoluție - 1296 px x 966 px. Dimensiunea senzorului 1/3 inch. Matrix - Sony. Transfer de date prin portul de mare viteză - 1394 BUS. Rata de cadre la rezoluție maximă - 32 de cadre/sec. Oferă lucrul cu obiecte în timp real

4. Comet Assay IV - un pachet software pentru Windows cu un generator de foi de calcul pentru Microsoft Excel, pentru lucrul cu o cameră video monocromă CCD IEEE1394 FireWire în timp real (măsurătorile și analizele sunt posibile atât pe un flux video, cât și pe fotografii), o instrucțiune manual și un CD pentru a instala și valida programul.

5. Licență de un an pentru patru utilizatori.

6. Învățare la distanță prin internet pentru patru utilizatori.

Se oferă suplimentar:

1. Operatorul de date să utilizeze Comet Assay IV în versiunile XML ale bazelor de date pentru căutarea, filtrarea și extragerea datelor și auditarea printr-o bază de date Oracle securizată salvată în format de foaie de calcul MS Excel. Include posibilitatea de a vizualiza imagini salvate automat, semnături, date arhivate și date de auditare automată. În plus, include posibilitatea de a exporta date nesemnate și semnate digital în format XML. Include doar Crypto-Key-Prove pentru a vizualiza datele semnate digital în diferite formate.

2. Acces manager la sistemul GLP. Access Manager este un program pentru controlul și gestionarea accesului angajaților la bazele de date. Sistem unificat pentru toxicologie genetică PI. Include un audit cuprinzător al sistemului. Audit extern. Administrarea conturilor de utilizator și a activităților utilizatorilor legate de programe, acces, parole, revizuiri etc. Utilizează Oracle pentru a proteja în siguranță utilizatorii și a audita datele. Respectarea deplină cu regulile finale ale FDA 21 CFR Partea 11 pentru înregistrările electronice și semnăturile electronice.

3. Instruire pentru un singur utilizator bazat pe instrumente perceptive în Marea Britanie

O serie de multe „găuri” microscopice pe suprafața gelului, fiecare dintre ele conține celula analizată.

Sub influența unui câmp electric, celulele plasate în gel încep să se miște, lăsând în urmă o urmă care seamănă cu coada unei comete. „Cozile” mai strălucitoare și mai lungi aparțin celulelor cu cel mai mare grad de deteriorare a ADN-ului.

ADN-ul nostru este în mod constant amenințat de radiații, razele ultraviolete, poluanții din alimentele noastre și din mediu. Toți acești factori pot deteriora materialul nostru genetic, ducând la cancer și alte boli.

Analiza leziunilor ADN-ului este crucială pentru înțelegerea naturii acestor boli și găsirea de noi tratamente, dar în prezent, metodele de detectare a leziunilor ADN necesită o muncă obositoare și consumatoare de timp. Cu toate acestea, un grup de bioingineri de la MIT a dezvoltat o nouă modalitate de a detecta rapid deteriorarea ADN-ului într-o varietate de setări, promițând să facă din o astfel de analiză o metodă comună în screening-ul la medicamente și în studiile epidemiologice ale expunerii la mediu.

Tehnica propusă se bazează pe un test vechi de 30 de ani, cunoscut sub numele de test Comet. Acest test este numit așa datorită formei asemănătoare unei comete a tamponului format de ADN-ul deteriorat. Dar, spre deosebire de metoda tradițională, noua tehnologie poate analiza un număr mult mai mare de celule și o poate face mult mai rapid.

Tehnologia ar putea oferi epidemiologilor o nouă modalitate de a detecta pericolele de mediu cu mult înainte ca acestea să provoace cancer, modalități medicilor de a îmbunătăți tratamentele pentru cancer și modalități de a descoperi noi medicamente și de a identifica medicamentele periculoase cercetătorilor din industria farmaceutică.

„Cea mai importantă caracteristică a tehnologiei noastre este că poate fi folosită pentru a detecta substanțe genotoxice (care provoacă mutanți) în mediu folosind cele mai de bază echipamente de cercetare”, spune Bevin Engelward, profesor asistent de bioinginerie și unul dintre co-autorii studiului. munca.

Articol pentru concurs "bio/mol/text": Știți că cometele sunt studiate nu numai de astronomi, ci și de biologi moleculari? Munca lor este legată de spațiu doar indirect. Ei privesc cometele printr-un microscop. Servește ca un cer înstelat lame de gel- lama microscopică de sticlă acoperită cu agaroză cu celulele studiate. Acest lucru a fost posibil prin descoperirea în 1984 a unei metode de analiză ADN numită metoda cometei ADN.

Despre popularitatea în cifre

Figura 2. Exemple de leziuni ADN rezultate din acțiunea unor factori de natură diferită

După cum puteți vedea, „tâlharii” pot comite o gamă uriașă de „crime” și pot provoca daune semnificative integrității ADN-ului. Cu toate acestea, în celulă, siguranța ADN-ului este păzită de sisteme de reparare, „vindecători” care corectează deteriorarea moleculei cu ajutorul unor „medicamente” speciale - enzime care pot „petice rănile” cauzate de genotoxici. Există multe enzime reparatoare. În prezent, se știe că repararea exciziei Deteriorarea ADN-ului, adică în operațiuni, când site-ul este mai întâi decupat și apoi reasamblat, iau parte 13 enzime!

Cu toate acestea, nu totul este atât de lin pe cât pare la prima vedere. Operațiunile din „departamentul de reparații” nu se încheie întotdeauna cu succes, adică. restaurarea moleculei originale de ADN. Rezultatul muncii sistemelor de recuperare poate fi noi daune. Motivul pentru aceasta este ambalarea foarte densă a catenelor de ADN din nucleu.

Dar ce rămâne cu oamenii de știință? Aceștia acționează ca „polițiști” care trebuie să identifice „componentele infracțiunii”, adică. găsiți „infractorul” și „complicii” acestuia (determinați genotoxici, dozele și concentrațiile acestora) și stabiliți gravitatea „infracțiunii” (identificați gradul de deteriorare a ADN-ului). Metoda cometei ADN ajută în astfel de situații.

Originar din Suedia

Încercările care vizează studierea structurilor nucleare ale celulei și determinarea cantitativă a leziunilor catenei ADN în celulele individuale ale organismelor au fost făcute încă din anii 1980. XX de oameni de știință precum Cook și Brazell, Rydberg și Johanson. Cu toate acestea, abia în 1984 cercetătorii suedezi Ostling și Johanson au dezvoltat o nouă metodă de detectare a leziunilor ADN. Ei au observat că imaginile fragmentelor de ADN care migrează într-un câmp electric semănau cu cometele astronomice. Era o asemănare. „Cometele” obținute de oamenii de știință din Suedia aveau principalele caracteristici ale „fraților” spațiali: aveau „cap” și „coada”. De aici a venit un nume atât de romantic - metoda cometei ADN.

Metoda are o serie de alte nume - electroforeza pe gel a celulelor unice (izolate). Și electroforeza in microgel . Prenumele reflectă incorect esența analizei. Electroforeza se efectuează nu în celule individuale, ci într-un gel de agaroză, unde ADN-ul izolat din aceleași celule se deplasează de la un pol la altul. Al doilea este corect, pentru că electroforeza se efectuează în gel de agaroză aplicat pe lame. Dar acest termen nu a prins. Aceste denumiri nu sunt foarte populare și sunt folosite rar, spre deosebire de „metoda cometei ADN”.

Vrăjiți pentru a obține „comete”

Figura 3. Structura „cometei”.

„Cometele” de laborator sunt obiecte interesante. Aspectul lor depinde direct de factorii de influență, puterea lor și condițiile analizei. Informațiile despre „comete” nu sunt un secret, învăluite în întuneric, așa că se știe aproape totul despre compoziția, structura și formarea lor.

Într-o publicație din 1984, suedezii Ostling și Johanson au numit ADN-ul care a migrat „coada” și ADN-ul rămas în cavitate „centru”. Acum, practic nimic nu s-a schimbat: „cometa” se distinge în mod convențional prin „cap” și „coada” (Fig. 3).

Trebuie să se înțeleagă clar că o „cometă” nu se formează dintr-o celulă a unui organism viu, ci din ADN-ul său. înglobat într-un strat de agaroză suspensie celulară formează cavități, care în proces liza ocupă ADN-ul acestor celule. Toate manipulările ulterioare în metoda cometei ADN sunt efectuate cu ADN.

„Cometele” se formează în procesul de migrare (mișcare) ADN-ului într-un câmp electric (când există curent și tensiune). Ce se întâmplă în timpul lizaȘi electroforeză? Biomoleculele mai mici care alcătuiesc celula „scapă” în soluția de liză în timpul difuziei, spre deosebire de ADN, care, datorită dimensiunii sale extrem de mari, nu se poate clinti. Când diapozitivele cu ADN sunt supuse electroforezei, ADN-ul intact formează un „cap de cometă”, iar părțile deteriorate ale moleculelor încep să „joc” spre o sursă de curent încărcată pozitiv - anodul (deoarece ADN-ul este încărcat negativ), formând o „coadă”. ”. Pentru a vedea „cometele” rezultate, acestea sunt colorate cu coloranți fluorescenți (bromură de etidio, portocaliu de acridină etc.), apoi vizualizate cu ajutorul unui microscop fluorescent la mărire mare (Fig. 4).

Ostling și Johanson scriu următoarele: „Când o celulă este încorporată într-un gel, formează o depresiune în ea. După liza celulară, ADN-ul său ocupă această depresiune. Majoritatea celorlalte biomolecule difuzează ușor prin gelul de agaroză. Astfel, aproape toate ies din cavitatea lăsată de celulă în soluția de lizare. Singura excepție este ADN-ul, care, datorită greutății sale moleculare mari, rămâne în gel. - Ed.

Figura 4. Secvența pașilor metodei cometei ADN(începând în sensul acelor de ceasornic de sus). * - Pasul este necesar doar în versiunea alcalină a metodei (pH > 13,0) pentru a neutraliza alcalii cu NaOH.

Cu cât deteriorarea ADN-ului este mai puternică (și gradul de deteriorare depinde de doza de mutagen), cu atât „coada cometei” este mai pronunțată. După cum ați înțeles deja, o „coadă” lungă nu este foarte bună.

soldat universal

Metoda cometei ADN este un instrument cu gamă largă. Cu ajutorul acestuia, oamenii de știință „rezolvă crimele” legate de o tentativă asupra sănătății umane și a siguranței mediului (desigur, toate acestea prin studiul ADN-ului deteriorat). Metoda a câștigat atât de populară datorită caracteristicilor sale atractive - simplitate, viteză, economie și sensibilitate suficient de mare, ceea ce face posibilă detectarea daunelor ADN-ului cauzate chiar și de factori de intensitate scăzută (de exemplu, doze mici de radiații). Dintre numeroasele metode de evaluare a leziunilor ADN, metoda cometei ADN este una dintre cele mai potrivite în acest domeniu. Pe lângă avantajele de mai sus, depășește, de exemplu, binecunoscutul metode citogenetice (ana-telofazic, analize metafazice, testul micronucleului), și din alte motive întemeiate.

Metoda cometei ADN vă permite să lucrați cu orice celule care conțin ADN, spre deosebire de testul cu micronucleu, care implică cel mai adesea celule de sânge sau de măduvă osoasă. Dacă metodele ana-telofază și metafază sunt limitate în lista de determinate aberatii cromozomiale, apoi metoda cometei ADN oferă o gamă largă de modificări ale acesteia, datorită cărora cercetătorul poate detecta o varietate de daune ADN: daune simple, duble, situsuri alcaline-labile, apoptoza si altii. Aceste oportunități îl fac un „soldat universal” și deschid calea metodei în diferite domenii ale cercetării științifice:

• monitorizarea mediului- evaluarea stării mediului în funcție de gradul de deteriorare a ADN-ului organismelor care trăiesc în zona de studiu (de regulă, se compară nivelurile de deteriorare a ADN-ului indivizilor din zonele contaminate și de control);
• monitorizarea biologică- studiul influenței nutriției și a altor factori externi de mediu asupra organismului în ceea ce privește gradul de deteriorare a ADN-ului, acumularea de deteriorare și reparare;
• studii genotoxice preparate farmacologice, substanțe chimice noi și existente (produse chimice de uz casnic, pesticide etc.);
• cercetări clinice vizează diagnosticul prenatal în stadiul de dezvoltare intrauterină, identificarea predispoziției la boli;
• marca de eficienta terapia cancerului și controlul acesteia.

Schimbarea se învață prin comparație

Observarea stării mediului, așa-numita. monitorizarea mediului, ajută cercetătorii să identifice schimbările de mediu și să tragă la timp un semnal de alarmă (mai ales în situații de urgență, de exemplu, la centrala nucleară de la Cernobîl în 1986 sau la centrala nucleară Fukushima Daiichi în 2011). Atunci când mediul înconjurător este poluat, metoda ADN-cometă în combinație cu organisme indicatoare este utilă. Listele de organisme caracteristice diferitelor habitate și cele mai sensibile la modificările stării mediului sunt destul de extinse și includ specii care pornesc de la bacterii Escherichia coliși algele genului Chlamydomonasși terminând cu plante superioare ( Lemna minor, Pinus sylvestris), mamifere ( Microtus oeconomus) și, desigur, o persoană (Fig. 5). În metoda cometei ADN, de regulă, nu sunt implicate organisme întregi, ci „părțile componente” ale acestora - celule care sunt deosebit de sensibile la modificările factorilor de mediu sau țesuturi din care aceste celule pot fi obținute. Celulele sanguine sunt de obicei prelevate de la animale: eritrociteȘi limfocite, hemocite(analogi ai eritrocitelor la nevertebrate), celomocite(celule care îndeplinesc o funcție imunitară la râme); la plante - celule ale meristemului, țesut care se divide intens.

Notă:În analiza deteriorării ADN-ului, pot fi utilizați și indivizi întregi dacă sunt reprezentați de o singură celulă, cum ar fi, de exemplu, Chlorella vulgaris.

Figura 5. Exemple de organisme indicator utilizate pentru a evalua starea mediului folosind metoda cometei ADN.

site-uri scuola-cucina.com, photosflowery.ru, 4pics.ru, kharkov-fish.ru.gg, 10-themes.com, worldartsme.com, sms.si.edu, wulovef.com, qygjxz.com, hdimagegallery.net , nhm.ac.uk, picstopin.com, functionalecology.org, akva-world.ru, moskvapark.naidich.ru, botany.natur.cuni.cz, rusrep.ru, animalsfoto.com, go-that.appspot.com hdimagelib.com

Cum funcționează metoda cometei ADN în acest caz? Oamenii de știință compară gradul de deteriorare a ADN-ului organismelor indicator care trăiesc în teritoriile studiate (contaminate) și de control (necontaminate): expuse la sol contaminat, apă etc., și la fel, dar care trăiesc în condiții normale de control, de ex. când nu există influenţă a factorului studiat sau este nesemnificativă. Evaluarea gradului de deteriorare a ADN-ului se realizează și în laboratoare, în condiții strict controlate, atunci când există o probă de organisme expuse la factorul sau grupul de factori studiat (radiații, metale, pesticide), și neapărat un grup de control ( nu experimentează acest efect).

Exemplu: Pe 11 martie 2011, în urma celui mai puternic cutremur din Japonia și a tsunami-ului ulterior, la centrala nucleară Fukushima Daiichi s-a produs un grav accident de radiații. În 2014, oamenii de știință japonezi au efectuat un studiu. Au selectat ca martori două locuri afectate de accident, unul cu un nivel ridicat de radiație (2,85 µSv/h) și unul cu un nivel scăzut (0,28 µSv/h). La râmele familiei Megascolecidae din aceste locuri s-a analizat gradul de deteriorare a ADN-ului. S-a dovedit că acest indicator este semnificativ mai mare la persoanele expuse la niveluri ridicate de radiații decât la persoanele din zona cu un nivel scăzut de expunere.

Scenariile pot varia. Gradul de deteriorare a ADN-ului în celule poate crește, scădea sau rămâne neschimbat. Un grad crescut de deteriorare a ADN-ului în organismele dintr-o zonă contaminată poate indica modificări interne în funcționarea celulelor, care duc la numeroase „defalcări” ale ADN-ului.

Exemple: Unele metale, care pătrund în organism, induc specii reactive de oxigen (ROS), provocând leziuni ADN; radiațiile ionizante contribuie la formarea radicalilor liberi, care sunt și „infractorii” ADN-ului. Acțiunea razelor ultraviolete poate duce la formare dimeri în ADN, rupând legătura celor două lanțuri ale sale și modificând astfel conformația moleculei.

Daunele reduse ale ADN-ului sau nicio diferență sugerează că organismele au făcut față „opresiunii” genotoxiceși adaptate la viață în aceste condiții nefavorabile. Această adaptare se numește adaptare. Dar asta este o cu totul altă poveste.

Ereditatea este o forță teribilă

Ați auzit de boli precum sindromul de rupere a cromozomilor (sindromul de deteriorare Nijmegen), xeroderma pigmentosa și tricotiodistrofia? Ele apar numai atunci când ambii părinți sunt purtători ai genei defectuoase (Fig. 6).

Există date în literatură despre posibilitatea utilizării metodei cometei ADN în diagnosticul acestor boli ereditare, ceea ce este deosebit de important în stadiul prenatal, adică. în timpul sarcinii.

Sindromul leziunii Nijmegen (Sindromul de rupere Nijmegen, NBS) este o boală asociată cu încălcări permanente ale integrității ADN-ului. Problema este că gena NBS1 apare o mutație care „se stinge” nibrină- o proteină care controlează repararea rupurilor de ADN pereche induse de radiații. De aceea persoanele care suferă de acest sindrom sunt extrem de radiosensibile. Bozena Novotna de la Institutul de Medicină Experimentală din Praga, în studiul său, susține că metoda cometei ADN este excelentă în identificarea purtătorilor heterozigoți ai genei. NBS1 printr-un nivel anormal de ridicat de deteriorare a catenelor de ADN din „cometele” limfocitelor.

Nu sunt mai puțin periculoase xeroderma pigmentoasăȘi tricotiodistrofie. Acestea sunt boli umane grave care sunt moștenite. În primul caz, la o scurtă expunere la soare la copii pe zonele deschise ale pielii (mâini, gât, față), apar mai întâi pete roșii, care ulterior se transformă în pigmentare pronunțată până la formarea de tumori. A doua boală se exprimă în păr și unghii fragile, retard mintal și anomalii în structura craniului.

Aceste boli sunt unite de o încălcare în activitatea de reparare a exciziei nucleotidelor. Pe baza succesului reparării exciziei nucleotidelor în celulele fetale folosind metoda cometei ADN, este posibil să se determine dacă copilul va suferi de aceste boli. Cazurile de astfel de diagnostic sunt descrise în literatură.

Cercetătorii s-au confruntat cu sarcina de a afla înainte de naștere dacă copiii ar suferi de xeroderma pigmentosa și tricotiodistrofie. Experimentele au fost efectuate în familii în care părinții sunt purtători ai genelor xeroderma pigmentosum ( familia X) și tricotiodistrofie ( familia Y) și au deja copii cu aceste boli .

Familia X: sarcina 15 saptamani, mama este purtatoare a genei xeroderma pigmentosa, exista un copil de 3 ani cu aceasta boala.

Familia Y: sarcina 10 saptamani, tata si mama - purtatori ai genei tricotiodistrofiei, doi copii cu tricotiodistrofie au murit la varsta de 22 luni si 6 ani, inca unul - ca urmare a avortului spontan (avort spontan).

Toate celulele au fost expuse la radiații ultraviolete timp de 45 de minute.

X Studiu de familie: Nivelul de deteriorare a ADN-ului în celulele fetale, determinat prin metoda cometei ADN, a fost apropiat de nivelul de deteriorare a ADN-ului în fibroblastele mame purtătoare, de exemplu. a corespuns nivelului de deteriorare a catenei în condiții normale de reparare a exciziei ADN. Concluzie - fatul este sanatos. Această concluzie a fost confirmată după nașterea unui copil normal.

Studiu de familie Y:în celulele fătului, în comparație cu fibroblastele tatălui și ale mamei, a fost dezvăluit un defect în activitatea de reparare excizială, care a fost confirmat și printr-o altă metodă care nu se bazează pe studiul reparației. Se dezvăluie că fătul este bolnav. După ce am discutat cu familia, s-a decis să se facă avort.

Industria este dușmanul sănătății umane

Sănătatea oamenilor care lucrează în instalații industriale sau care locuiesc în zone neprietenoase mediului este în pericol în fiecare zi. Pericolul constă nu numai în contactul strâns zilnic al organismului cu substanțele genotoxice (radiații ionizante, metale grele și alte substanțe chimice), ci și în probabilitatea unor situații de urgență (a se vedea exemplele de mai sus), ale căror consecințe pot fi catastrofale pentru organisme. Schimbările în starea corpului pot fi foarte diferite, de la afecțiuni ușoare precum durerile de cap până la cancer.

Metoda cometei ADN poate fi folosită ca un instrument promițător evaluarea initiala starea genomului persoanelor care lucrează sau trăiesc în condiții nefavorabile pentru mediu. Aceasta înseamnă că cometele ADN pot fi utilizate nu numai în aceste domenii de cercetare, ci și în alte domenii în viitor, extinde opțiunile de utilizare a metodei în cercetarea clinică, medicină și multe altele.

Exemple:În Polonia, un accident la o fabrică de baterii i-a expus pe muncitori la niveluri ridicate de plumb și cadmiu, ceea ce a dus la o creștere mică, dar semnificativă, a daunelor ADN-ului în comparație cu un grup de oameni care nu au suferit un astfel de stres. Efectul genotoxic al aerosolilor de sudare cu gaz care conțin metale grele - mangan, crom, nichel, cadmiu, cobalt, plumb, molibden, fier - asupra ADN-ului leucocitelor a fost dezvăluit pentru persoanele a căror activitate a fost asociată cu sudarea de mult timp.

Există unele dificultăți

Pentru a utiliza corect metoda cometei ADN, trebuie să „cunoașteți din vedere” nu numai capacitățile și avantajele acesteia față de alte metode, ci și, desigur, dezavantajele, limitările și dificultățile pe care trebuie să le urmăriți. Metoda cere optimizare liză, electroforeză și alte condiții în funcție de tipul de celule pe care omul de știință le folosește și de scopurile studiului.

Explicaţie: Celulele vegetale și animale necesită condiții diferite pentru eliberarea ADN-ului, de exemplu. liza. Datorită prezenței unui perete celular de celuloză, celulele vegetale durează mai mult pentru a se liza decât celulele animale.

De la prima dificultate urmează al doilea inconvenient: adaptarea metodei la problemele de analiză poate fi foarte dificilă. proces laborios(deși tehnica în sine este simplă și de înțeles), mai ales dacă nimeni nu a lucrat cu obiectul studiului tău folosind metoda cometei ADN. Se întâmplă că „ajustarea” metodologiei în acest caz necesită mult timp.

Uneori există dificultate în interpretare rezultate obținute prin gradul de deteriorare a ADN-ului, întrucât gradul de deteriorare nu poate fi întotdeauna corelat cu doza factorului de influență.

Explicaţie: O astfel de problemă poate fi asociată cu o optimizare insuficientă a metodei, atunci când unele tipuri de daune sunt amestecate cu altele și, prin urmare, distorsionează rezultatele. Sistemele de reparare, care corectează o parte din încălcările rezultate, pot, de asemenea, „deranja” gradul real de deteriorare a ADN-ului.

Una dintre cele mai mari dificultăți poate fi compararea rezultatelor obținut prin metoda cometei ADN de diferiți oameni de știință din diferite laboratoare și institute de cercetare. Pentru a evalua deteriorarea ADN-ului, se folosesc metode cu modificări și indicatori complet diferiți (de exemplu, procentul de ADN din „coada cometei” sau lungimea „cozii”).

Explicaţie: Lungimea „cozii cometei” este distanța pe care ADN-ul a migrat de la „capul” cozii. Procentul de ADN din coada cometei este cantitatea de ADN care a migrat în coadă, exprimată ca procent. O listă completă a scorurilor daunelor ADN poate fi găsită la www.cometassaindia.org.

Se fac eforturi pentru standardizarea utilizării metodei cometei ADN, care va ajuta oamenii de știință să compare rezultatele. De exemplu, protocoale și linii directoare au fost dezvoltate în studiile genotoxice.

Explicaţie: Orientările Centrului Federal pentru Igienă și Epidemiologie din Rospotrebnadzor definesc în mod clar obiectele de testare (celule umane) și descriu în detaliu toate etapele analizei. Conform acestor recomandări, folosind metoda cometei ADN, substanțele chimice de uz casnic și produsele din materiale polimerice pot fi testate pentru genotoxicitate.

Concluzie

„Cine este înarmat este protejat” - acesta este motto-ul lucrului cu metoda cometei ADN. Cunoașterea avantajelor și dificultăților utilizării acestei metode pentru evaluarea daunelor ADN vă permite să manipulați cu pricepere fluxul de lucru, să evitați „capcanele” și să obțineți rezultate corecte.

Metoda cometei ADN joacă rolul unei „baghete magice” în evaluarea stării generale a corpului, de regulă, în stadiile incipiente ale expunerii la factorii de mediu negativi. În stadiul inițial, afectarea ADN-ului este cea mai rapidă și, prin urmare, singurul răspuns măsurabil al organismului la efectele adverse cu mult înainte de apariția modificărilor la nivel fiziologic.

Acum știi cum biologii obțin „comete” în laboratoare și de ce au atâta nevoie de ele.

Literatură

1. Liao W., McNutt M.A., Zhu W.-G. (2009). Testul cometei: o metodă sensibilă pentru detectarea daunelor ADN-ului în celule individuale. metode. 48 , 46–53;
2. Inge-Vechtomov S.G. Genetica cu bazele selecției: un manual pentru studenții instituțiilor de învățământ superior (ediția a III-a, revizuită și completată). Sankt Petersburg: N-L, 2015. - 720 p.;
3. Piperakis S.M. (2009). Testul cometei: o scurtă istorie. Biol celular. Toxicol. 25 , 1–3;
4. Yarmonenko S.P. Radiobiologia omului și animalelor. M.: Mai sus. şcoală, 2004. - 549 p.;
5. Bucătar P.R. și Brazell I.A. (1976). Caracterizarea structurilor nucleare care conțin ADN superhelical. J. Cell Sci. 22 , 303–324;
6. Rydberg B. și Johanson K.J. Estimarea rupurilor cu o singură catenă în celulele unice de mamifere. În: Mecanisme de reparare a ADN-ului / ed. de Hanawalt P.C, Friedberg E.C, Fox C.F. NY: Academic, 1978. pp. 465–468;
7. Ostling O. și Johanson K.J. (1984). Studiu microelectroforetic al daunelor ADN-ului induse de radiații în celulele individuale de mamifere. Biochim. Biophys. Res. comun. 123 , 291–298;
8. Cotelle S. și Ferard J.F. (1999). Testul cometelor în ecotoxicologie genetică: o revizuire. Mediul. Mol. Mutagen. 34 , 246–255;
9. Tice R.R., Agurell E., Anderson D., Burlinson B., Hartmann A., Kobayashi H. et al. (2000). Test de gel/cometă cu o singură celulă: linii directoare pentru in vitroși in vivo teste de toxicologie genetică. Mediul. Mol. Mutagen. 35 , 206–221;
10. Filippov E.V. (2014). Utilizarea metodei „ADN cometă” pentru detectarea și evaluarea gradului de deteriorare a ADN-ului celulelor organismelor vegetale, animale și umane cauzate de factori de mediu (revizuire) . Știință și educație. 2 , 72–78;
11. Collins A.R. (2004). Testul cometei pentru deteriorarea și repararea ADN-ului: principii, aplicații și limitări. Mol. Biotehnologia. 26 , 249–261;
12. Fujita Y., Yoshihara Y., Sato I., Sato S. (2014). Radioactivitatea mediului dăunează ADN-ului râmelor din Prefectura Fukushima, Japonia. Euro. J. Wildl. Res. 60 , 145–148;
13. Barillet S., Buet A., Adam C., Devaux A. (2005). Expunerea la uraniu induce genotoxicitate la teleostean Danio rerio? Primele rezultate experimentale. Radioprotecție. 40 , 175–181;
14. Kagan M.Yu., Shulakova N.S., Tumirova R.A., Zlodeeva E.A., Reznik N.V. (2012). sindromul Nijmegen (observare clinică). Farmacologie pediatrică. 3 , 102–105;
15. Alapetite C., Benoit A., Moustacchi E., Sarasin A. (1997). Testul cometei ca test de reparare pentru diagnosticul prenatal al Xeroderma pigmentosum și tricotiodistrofie. J. Invest. Dermatol. 108 , 154–159;
16. Palus J., Rydzynski K., Dziubaltowska E., Wyszynska K., Natarajan A.T., Nilsson R. (2003). Efectele genotoxice ale expunerii profesionale la plumb și cadmiu. Mutat. Res. 540 , 19–28;
17. Tomilin N.V., Petrov A.N., Filko O.A., Khrabrova A.V., Solovieva N.E., Ivanova T.M. et al. (2015). Evaluarea gradului de deteriorare a ADN-ului nuclear în celulele sanguine periferice ale persoanelor asociate profesional cu acțiunea metalelor grele. Organizația de sănătate. 16 , 383–392;
18. Evaluarea proprietăților genotoxice prin metoda cometei ADN in vitro: Instrucțiuni . M.: Centrul Federal de Igienă și Epidemiologie din Rospotrebnadzor, 2010.- 16 p.

Parametrii de fragmentare a ADN-ului au fost studiați prin metoda cometelor ADN în modificare alcalină în condiții de diferite niveluri de expunere la factorul de radiație în condiții domestice. Au fost luate în considerare activitatea volumetrică (VA) a radonului, rata de doză echivalentă ambiantă (AEDR) a radiațiilor gamma și densitatea de flux a radiației beta. Valoarea medie a RA a radonului în aerul interior a fost de 89,4 Bq/m3, valoarea ADER a fondului gamma a fost de 0,12 µSv/h, densitatea de flux a radiației beta a fost de 0,6 s-1. Nivelul mediu de fragmentare ADN a fost de 3,48%. Nivelul fragmentării ADN-ului în 3 parametri (proporția de ADN în coada cometei, lungimea cozii cometei, momentul cozii cometei) a fost crescut la bărbați, dar această tendință nu a atins semnificație statistică. Parametrii cometelor ADN nu au diferit semnificativ în funcție de modificarea nivelului de radon. S-a găsit o corelație pozitivă între performanța cometelor ADN și o creștere a puterii radiațiilor gamma. Totodată, ADER-ul radiațiilor gamma s-a încadrat în limitele admise în toate spațiile examinate.

radiatii ionizante

comete cu ADN

modificarea alcalină a cometelor ADN

efectele radiațiilor cu doze mici

1. Robertson A., Allen J., Laney R., Curnow A. Efectele carcinogene celulare și moleculare ale expunerii la radon: o revizuire // Int. J. Mol. Sc., 2013, vol. 14, nr. 7, pp. 14024-14063.

2. Druzhinin V.G., Sinitsky M.Y., Larionov A.V. et al. Evaluarea nivelului de aberații cromozomiale în limfocitele din sângele periferic la copiii rezidenți pe termen lung în condiții de expunere ridicată la radon și produșii săi de degradare // Mutagenesis, 2015, voi. 30, pp. 677–683.

3. Singh N.P., McCoy M.T., Tice R.R., Schneider E.L. O tehnică simplă pentru cuantificarea nivelurilor scăzute de deteriorare a ADN-ului în celule individuale // Exp. Cell Res., 1988, voi. 175, pp. 184–191.

4. Azqueta A., Gutzkow K.B., Brunborg G., Collins A.R. Către un test de cometă mai fiabil: optimizarea concentrației de agaroză, timpul de desfășurare și condițiile de electroforeză // Mutat. Res., 2011, voi. 724, nr. 1–2, pp. 41-45.

5. Konca K., Lankoff A., Banasik A. et al. Un program de analiză a imaginii de pe domeniul public pe platformă încrucișată pentru testul cometei // Mutation Research, 2003, voi. 534, pp. 15-20.

6Glantz S.A. Primer de Biostatistică / S.A. Glantz. – McGraw-Hill Medical, ediția a 7-a, 2011. – 320 p.

7. Georgakilas A.G., O’Neill P., Stewart R.D. Inducerea și repararea leziunilor ADN grupate: ce știm până acum? // Radiat. Res., 2013, vol. 180, pp. 100–109.

8. Kaur S., Sangeeta, Galhna K.K., Gautam N. Evaluarea leziunilor ADN induse de radiații în limfocitele din sângele periferic uman folosind testul COMET // Int. J. Life Sci. științific. Res., 2017, vol. 3, nr. 4, pp. 1208-1214.

9. Miklos M., Gajski G., Garaj-Vrhovac V. Utilizarea testului de cometă standard și modificat în evaluarea leziunilor ADN în limfocitele umane după expunerea la radiații ionizante // Radiologie și Oncologie, 2009, voi. 43, nr. 2, pp. 97-107.

10. Batar B., Guven M., Baris S. et al. Polimorfismele genei de reparare a ADN-ului XPD și XRCC1 și riscul de leucemie limfoblastică acută în copilărie // Leuk. Res., 2009, voi. 33.pp. 759–763.

11. Jiang J., Zhang X., Yang H., Wang W. Polimorfisme ale genelor de reparare a ADN-ului: ADPRT, XRCC1 și XPD și riscul de cancer în epidemiologia genetică // Meth. Mol. Biol., 2009, voi. 471.pp. 305–333.

12. Larionov A.V., Sinitsky M.Yu., Druzhinin V.G. et al. Polimorfismele genelor de reparare a exciziei ADN și de reparare a ruperii duble-catenari și nivelul de aberație cromozomală la copiii cu expunere pe termen lung la radon // Int. J. Radiat. Biol., 2016, voi. 92, nr. 8, pp. 466-474.

13. Wojewodzka M., Kruszewski M., Iwanenko T. et al. Lipsa efectului advers al fumatului asupra ruperii catenei ADN și a deteriorarii bazei, așa cum a evidențiat testul cometei alcaline // Mutat. Res., 1999, voi. 440, pp. 19–25.

14. Geric M., Gajski G., Orescanin V., Garaj-Vrhovac V. Sezonal variations as predictive factors of the comet assay parameters: a retrospective study // Mutagenesis, 2017, doi:10.1093/mutage/gex023.

Impactul radonului a fost bine studiat în intervalul de concentrație mare. Standardele de igienă stabilite prevăd un nivel de activitate volumetrică de echilibru echivalent (EEVA) de 200 Bq/m3 ca limită a activității volumetrice admise a radonului în aerul rezidențial. În același timp, într-o serie de țări, nivelul admisibil a fost crescut la 400 Bq/m3, ceea ce se explică, în primul rând, prin caracteristicile geologice ale teritoriului. Pe de altă parte, există un punct de vedere asupra necesității reducerii nivelului admis la 2 pCu/l, ceea ce corespunde la 74 Bq/m3. În cadrul paradigmei moderne OMS și al principiului creșterii liniare fără prag a efectelor radiațiilor, chiar și o expunere mică la radiații duce la o creștere a riscului de efecte stocastice (în primul rând cancer).

Evident, efectele mici ale radiațiilor care afectează grupuri mari de oameni pot duce la o creștere semnificativă din punct de vedere social a incidenței cancerului. Ca urmare, pare extrem de important să se acumuleze informații despre efectele diferitelor tipuri de radiații ionizante în doze mici, la care întreaga populație a planetei este expusă într-un grad sau altul. O creștere a EEVA de radon peste 200 Bq/m3 este recunoscută ca nedorită pentru majoritatea standardelor acceptate în domeniul igienei radiațiilor. În același timp, doar 5-10% din spațiile rezidențiale pot fi atribuite spațiilor cu un asemenea nivel de expunere. Nivelul activității volumetrice (VA) a radonului la 2 pCu/l (74 Bq/m3) și mai mare se poate observa în 20-50% din spațiile de locuit, în funcție de tipul de dezvoltare și de amplasarea geografică. Evident, chiar și expunerea de intensitate scăzută la radon poate duce la o creștere semnificativă a incidenței, având în vedere amploarea globală a problemei. Pare relevant să studiem efectul încărcăturilor cu doze mici de radiații dens ionizante asupra corpului uman.

Radonul este în prezent recunoscut drept unul dintre cei mai periculoși agenți cancerigeni care afectează oamenii. În natură, factorul de radiație radon nu joacă un rol semnificativ, deoarece gazul radon se disipează într-un volum mare de aer și se descompune destul de repede (timp de înjumătățire Rn222 = 3,82 zile). În același timp, clădirile rezidențiale și tehnice sunt un fel de capcane care acumulează radon (de până la 10 ori în comparație cu aerul liber). Focarele de radon sunt adesea localizate sporadic, radonul este considerat cauza principală a creșterii frecvenței aberațiilor cromozomiale în grupuri similare expuse.

Una dintre metodele eficiente de biomonitorizare este evaluarea directă a gradului de deteriorare a ADN-ului în celulele sanguine prin metoda „ADN cometei” (electroforeza pe gel a celulelor individuale). Această metodă implică liza celulelor plasate într-un gel de agaroză, în timp ce ADN-ul migrează într-un câmp electric. Celulele cu o frecvență crescută de rupere duble se caracterizează printr-o migrare crescută a ADN-ului către anod. În 1988, Singh și colegii au propus o modificare alcalină a metodei, inclusiv o etapă de liză la pH>13. Această versiune crește semnificativ sensibilitatea metodei, permițând detectarea unor rupturi unice, a site-urilor alcali-labile, a legăturilor încrucișate ADN-ADN și ADN-proteină, precum și a locurilor de reparare incompletă. Deoarece efectele unei singure rupturi de ADN predomină pentru majoritatea genotoxicelor, modificarea alcalină a metodei a făcut posibilă creșterea semnificativă a conținutului de informații și a sensibilității testului. Unul dintre principalele avantaje este capacitatea de a detecta efectele genotoxice în condiții de acțiune simultană a factorilor citotoxici care duc la formarea de tulburări cromozomiale, dar nu au un efect genotoxic. În condiții de pH>12, ADN-ul se denaturează și firele se desfășoară din cauza distrugerii legăturilor de hidrogen dintre cele 2 elice. La atingerea unui pH de 12,6 situsurile alcaline labile, cum ar fi situsurile apurină/apirimidină, sunt transformate în rupturi unice de ADN. La pH>13 se atinge gradul maxim de transformare a situsurilor alcaline labile.

materiale si metode

Caracteristica eșantionului

Fiecare persoană chestionată a completat un chestionar personal care a inclus informații despre vârstă, starea de sănătate, consumul de tutun și alcool, riscuri profesionale, proceduri de diagnosticare cu raze X, călătorii cu avionul, vaccinări și aportul de medicamente în cele 3 luni premergătoare sondajului. A fost selectat un grup de 39 de subiecți care nu au fost expuși la factori potențial genotoxici. Toți cei examinați aveau vârsta sub 40 de ani. Un total de 18 bărbați (vârsta medie 29 de ani) și 21 de femei (vârsta medie 31 de ani) au fost examinați.

Studiul a fost realizat în conformitate cu cerințele Comisiei de etică a Universității de Stat din Kemerovo, protocolul de studiu a fost aprobat la ședința Comisiei nr. 4 din 10 octombrie 2016. Fiecare participant a semnat un formular de consimțământ informat care conținea informații despre obiectivele studiului.

Probe de biomateriale

Probele de sânge venos au fost colectate în tuburi vid de 4 ml conţinând sodiu-EDTA ca anticoagulant. Materialul a fost recoltat din noiembrie 2016 până în aprilie 2017. În 1-2 ore, probele au fost transportate la laborator. Toate probele au fost codificate și procesate. Metoda cometei ADN a fost începută imediat după sosirea probelor.

Electroforeza pe gel a celulelor individuale (metoda cometei ADN)

Metoda cometei ADN a fost realizată într-o modificare alcalină dezvoltată de Singh și colab. Primul strat de gel a fost o soluție 1% de agaroză standard (Applichem, SUA). Celulele au fost placate cu 1% agaroză cu punct de topire scăzut (Applichem, SUA) la 39°C. 70 μl dintr-o suspensie de celule sanguine în agaroză cu punct de topire scăzut au fost plasați pe un pahar cu agaroză standard și plasați pe gheață până când gelul s-a solidificat complet. După solidificare, lamele au fost plasate într-un tampon de liză la 4°C timp de 12 ore. Compoziția tamponului de liză: 2,5 mol/l NaCl (Vekton, Rusia), 0,1 mol/l Na2EDTA (Vekton, Rusia), 1% Triton X-100 (Amresco, SUA), 10% DMSO ("Vekton", Rusia). ). După liză, electroforeza orizontală (300 mA, 25 V, 30 min) a fost efectuată în tampon alcalin (pH>13). Electroforeza a fost precedată de 20 min. tratament cu un tampon alcalin (300 mM NaOH (Vekton, Rusia), 1 mM Na2EDTA (Vekton, Rusia). Liza și electroforeza au fost efectuate la 4°C în absența razelor directe ale soarelui. După electroforeză, paharele au fost neutralizate de trei ori în soluție salină tamponată cu fosfat PBS pH 7,5 (Amresco, SUA) După aceea, lamelele au fost tratate cu etanol 70% timp de 5 minute, uscate și colorate cu 50 ui dintr-un singur SYBR GREEN (Biotech-Industriya, Rusia).

Analiza „cometelor”

Parametrii de fragmentare au fost evaluați prin microfotografie a preparatelor colorate cu SYBR GREEN folosind un microscop Zeiss Axio Imager 2. Un total de 100 de comete selectate aleatoriu au fost fotografiate din fiecare probă studiată la mărire x400. Prelucrarea ulterioară a fotografiilor a fost efectuată folosind pachetul software CASP. Au fost calculați parametrii lungimii cozii cometei, momentului cozii și fracției de ADN din coada cometei.

Metode statistice

Analiza datelor statistice a fost efectuată folosind pachetul Statistica 10.0. Pentru scoruri, au fost calculate valorile medii și limitele intervalului de încredere de 95% (CI 95). Comparațiile de grup au fost făcute folosind testul U Mann-Whitney. Gradul de semnificație a fost luat la nivelul de 5%. Corelația dintre măsuri pentru cazul datelor neparametrice a fost calculată folosind coeficientul de corelație al lui Pearson pentru ranguri. Totodată, pentru eșantioane de peste 50 de persoane, a fost calculată și valoarea testului Student, pe baza valorii coeficientului de corelație Pearson.

rezultate

Ponderea ADN-ului în coada cometei nu a depășit 15%. Valoarea medie a activității volumetrice (VA) a radonului în aerul interior a fost de 89,4 Bq/m3, valoarea AEDR a fondului gamma a fost de 0,12 μSv/h, densitatea fluxului de radiații beta a fost de 0,6 s-1. Nivelul fragmentării ADN-ului în 3 parametri a fost crescut la bărbați, dar această tendință nu a atins semnificație statistică (Tabelul 1).

tabelul 1

Indicatori ai fragmentării ADN-ului la bărbații și femeile examinați

Nivelul de 74 Bq/m3, corespunzător la 2 pCu/l de aer, a fost ales ca nivel limită al radonului RA din aer. Valoarea medie a radonului a fost de 47 Bq/m3 în primul grup și de 143 Bq/m3 în al doilea grup. Cel mai mare conținut de informații a fost stabilit pentru indicatorul momentului cozii cometelor. Momentul cozii a fost crescut în grupul cu radon superior, dar această tendință nu a atins nivelul de semnificație statistică (Tabelul 2). Această tendință este tipică doar pentru bărbații chestionați.

masa 2

Indicatori ai fragmentării ADN-ului în grupuri diferențiate după sex și OA radon

De asemenea, a fost studiată o posibilă dependență a indicatorilor ADN de mărimea ADER a radiațiilor gamma în spațiile rezidențiale. Pentru verificare, a fost calculat coeficientul de corelație dintre indicii de deteriorare a ADN-ului și ADER a radiațiilor gamma. S-a constatat o corelație pozitivă între parametrii cometelor ADN și o creștere a puterii radiațiilor gamma (figura). Totodată, ADER-ul radiațiilor gamma s-a încadrat în limitele admise în toate spațiile examinate.

Dependența indicatorilor de fragmentare a ADN-ului de AEDR a radiațiilor gamma în spațiile rezidențiale (r - coeficientul de corelație Spearman, p - probabilitatea ipotezei „nule”)

Discuţie

Expunerea la radiații

Radiațiile ionizante sunt capabile să inducă formarea de clustere de deteriorare a ADN-ului, care se realizează sub formă de ruperi dublu-catenari și alte daune situate compact. Rareori și dens radiațiile ionizante provoacă aproximativ același număr de leziuni individuale de ADN pe unitatea de doză absorbită, dar în cazul radiațiilor dens ionizante (particule alfa), aceste leziuni sunt distribuite într-un număr mai mic de regiuni ADN, ceea ce implică o creștere a numărul de leziuni din grup; de exemplu, numărul mediu de daune dintr-un cluster tinde să crească odată cu transferul liniar de energie. Radiațiile gamma, înregistrate în locurile de reședință ale tuturor celor examinați, nu depășesc valorile de fond reglementate. Schimbările în fundalul gamma, cel mai probabil, au fost cauzate de caracteristicile clădirilor și ale materialelor de construcție.

Analiza „cometelor”

Metoda cometei ADN este un test simplu și rapid care măsoară eficient nivelul de deteriorare a ADN-ului și repararea daunelor în urma expunerii. În acest studiu, nu a fost găsită o eterogenitate semnificativă în ceea ce privește nivelul de deteriorare a ADN-ului în populația studiată. Într-o serie de lucrări dedicate dozimetriei biologice, dificultățile de a dezvălui efectul dozelor mici de radiații au fost remarcate mai devreme. În același timp, majoritatea studiilor au studiat grupuri de persoane expuse la o sursă artificială externă, de exemplu, personalul instalațiilor radiologice și radiologice.

Măsurătorile ratelor de fragmentare a ADN-ului pot reflecta atât nivelul individual de deteriorare a ADN-ului, cât și capacitatea de a repara daunele cauzate de radiații. Anterior, o serie de studii au stabilit capacitatea genelor de reparare de a modula frecvența tulburărilor materiale ereditare. Modelul observat de deteriorare a ADN-ului este rezultatul unui echilibru între deteriorarea și repararea ADN-ului, iar nivelurile scăzute de deteriorare sau lipsa unor corelații puternice pot fi rezultatul atât al deteriorării scăzute, cât și al eficienței ridicate a reparației individuale.

Potrivit unor estimări, sezonul anului (parametrii cresc vara) și expunerea medicală au cea mai mare contribuție la creșterea indicatorilor ADN-ului cometei pentru factorii de neproducție. În munca noastră, acești factori nu pot avea un impact semnificativ, întrucât recoltarea materialului biologic s-a efectuat în perioada de iarnă a anului, iar toate persoanele care au fost supuse examinărilor cu raze X în cele 3 luni premergătoare studiului au fost excluse din eșantion. . Lipsa corelațiilor cu concentrația în volum a radonului se poate datora dimensiunii reduse a eșantionului. În viitor, este planificată continuarea acestei linii de cercetare cu o creștere a dimensiunii eșantionului.

Concluzie

Studiul efectelor expunerii pe termen lung la doze mici de radiații este o sarcină dificilă; nevoia de a selecta probe și de a controla factorii concomitenți poate distorsiona imaginea. În studiul prezentat nu s-au putut identifica corelații semnificative statistic cu indicatorii activității volumetrice a radonului, dar, în același timp, corelațiile constatate cu indicatorii de fond gamma indică perspectivele acestui studiu. Este evident că este necesar să se evalueze factorul de eficiență a reparației celor examinați pentru un studiu de acest tip; acest lucru ar permite diferențierea și compararea persoanelor cu caracteristici de reparație similare.

Nu există conflicte de interese legate de acest studiu.

Studiul a fost susținut de Fundația Rusă pentru Cercetare de bază (nr. 16-34-60069\15 mol_a_dk).

Link bibliografic